Инструменты пользователя

Инструменты сайта


вирусы

Вирус

вирус ВИЧВирус – это небольшой инфекционный агент, который реплицируется только внутри живых клеток других организмов. Вирусы могут заражать все типы живых организмов, начиная от животных и растений и заканчивая микроорганизмами, включая бактерии и археи. После статьи Дмитрия Ивановского 1892 года, описывающей небактериальный патоген, заражающий растения табака, а также после открытия Бейеринком вируса табачной мозаики в 1898 году, было подробно описано около 5000 видов вирусов, хотя в природе существуют миллионы типов вирусов. 1) Вирусы встречаются практически во всех экосистемах на Земле и являются наиболее распространенным типом биологических организмов. Изучением вирусов занимается вирусология, подспециальность микробиологии.

Не находясь внутри инфицированной клетки или в процессе инфицирования клетки, вирусы существуют в виде независимых частиц. Эти вирусные частицы, также известные как вирионы, состоят из двух или трех частей: (I), генетического материала, получаемого из ДНК или РНК, длинных молекул, которые несут генетическую информацию; (II) белковой оболочки, называемой капсид, которая окружает и защищает генетический материал; а в некоторых случаях (III) оболочки из липидов, которая окружает белковую оболочку, когда она находится вне клетки. Формы этих вирусных частиц варьируются от простых спиральных и икосаэдрических форм до более сложных структур. Большинство видов вирусов имеют вирионы столь малого размера, что их невозможно разглядеть при помощи оптического микроскопа. Средний размер вирионов составляет около одной сотой от размера средней бактерии. Происхождение вирусов в истории эволюции жизни не ясно: некоторые вирусы, возможно, произошли от плазмид – кусочков ДНК, которые могут перемещаться между клетками, в то время как другие, возможно, произошли от бактерий. В процессе эволюции, вирусы являются важным средством горизонтального переноса генов, увеличивая генетическое разнообразие. Некоторые считают вирусы формой жизни, потому что они несут генетический материал, воспроизводятся и развиваются путем естественного отбора. Однако, у вирусов нет основных характеристик (например, структуры клеток), которые, как правило, считаются необходимыми для того, чтобы считать их живыми организмами. Из-за того, что вирусы обладают некоторыми, но не всеми, нужными качествами, их называют «организмами на краю жизни», 2) а также репликаторами. Вирусы распространяются различными способами; вирусы растений часто передаются от растения к растению насекомыми, которые питаются соком растений, такие как тля; вирусы животных могут передаваться при помощи кровососущих насекомых. Эти организмы, переносящие заболевания, называются векторами. Вирусы гриппа распространяются через кашель и чихание. Норовирус и ротавирус, общие причины вирусного гастроэнтерита, передаются фекально-оральным путем и передаются от человека к человеку при их контакте, или попадая в организм через пищу или воду. ВИЧ является одним из нескольких вирусов, передающихся половым путем и через воздействие зараженной крови. Диапазон клеток-хозяев, которые способен инфицировать вирус, называется его «кругом хозяев». Этот круг может быть узким, что означает, что вирус способен инфицировать несколько видов живых организмов, или широким, и тогда вирус способен инфицировать многие виды живых организмов. Вирусные инфекции у животных вызывают иммунный ответ, который, как правило, подавляет заражающий вирус. Иммунные реакции могут также развиваться в ответ на вакцины, которые дают искусственно приобретенный иммунитет к специфической вирусной инфекции. Тем не менее, некоторые вирусы, включая вирусы, которые вызывают СПИД и вирусный гепатит, обходят эти иммунные реакции и приводят к хроническим инфекциям. Антибиотики не действуют на вирусы, однако было разработано несколько антивирусных препаратов.

Этимология

Слово «вирус» произошло от латинского слова среднего рода virus, обозначающего яд и другие вредные жидкости, из «той же индоевропейской базы, как и санскритское слово viṣa (яд), авестийское vīša (яд), древнегреческое ἰός (яд). В английском языке, слово virus впервые упоминается в 1398 году в переводе Джона Тревиза сочинения Бартоломея Английского «De Proprietatibus Rerum». Слово virulent, произошедшее от латинского virulentus (ядовитый), восходит к 1400 году. Значение слова «агент, который вызывает инфекционное заболевание» впервые было описано в 1728 году, до открытия вирусов Дмитрием Ивановским в 1892 году. Английское множественное число – viruses (иногда также viri или vira), в то время как латинское слово является массовым существительным, которое никогда не было классически засвидетельствовано в виде множественного числа (однако в нео-латинском используется слово vīra). Прилагательное viral (вирусный) произошло в 1948 г. Термин вирион (множественное число вирионы) был создан в 1959 г. 3) и также используется для обозначения одной, стабильно инфекционной вирусной частицы, которая высвобождается из клетки и вполне способна инфицировать другие клетки того же типа.

История

Луи Пастер не смог найти возбудитель бешенства и думал о существовании патогена, слишком малого для того, чтобы быть обнаруженным при помощи микроскопа. 4) В 1884 году французский микробиолог Чарльз Чамберленд изобрел фильтр (известный сегодня как фильтр Чамберленда или фильтр Чамберленда-Пастера) с порами меньшего размера, чем бактерии. Таким образом, Чамберленд смог пропустить раствор, содержащий бактерии, через фильтр, и полностью удалить их из раствора. В 1892 году русский биолог Ивановский использовал этот фильтр, чтобы изучить то, что сейчас известно как вирус табачной мозаики. Его опыты показали, что измельченные экстракты из инфицированных растений табака остаются заразными после фильтрации. Ивановский предположил, что инфекция может быть вызвана токсином, вырабатываемым бактериями, однако он не развил эту идею. В то время считалось, что все инфекционные агенты могут быть сохранены с помощью фильтров и выращены в питательной среде – это было частью микробной теории болезни. В 1898 году голландский микробиолог Мартин Бейеринк повторил эти эксперименты и убедился в том, что в отфильтрованном растворе содержалась новая форма инфекционного агента. Он заметил, что агент реплицировался только в делящихся клетках, но его эксперименты не показали, что он состоял из частиц, он назвал его contagium vivum fluidum (растворимый живой микроб) и повторно ввел слово вирус. Бейеринк утверждал, что вирусы являются жидкими в природе, однако эта теория позже была дискредитирована Уэнделлом Стэнли, который доказал, что вирус имеет вид частиц. В том же году, Фридрих Лефлер и Пол Фрош пропустили первый вирус животного – агент ящура (афтовируса) – через подобный фильтр 5). В начале 20-го века, английский бактериолог Фредерик Туорт обнаружил группу вирусов, поражающих бактерии, которые теперь называются бактериофагами (или часто просто фагами), а франко-канадский микробиолог Феликс д'Эрелль описал вирусы, которые, при добавлении к бактерии на агаре, производят области мертвых бактерий. Он точно растворил суспензию с этими вирусами и обнаружил, что при самом высоком разбавлении (минимальная концентрации вируса) формируются дискретные участки мертвых организмов, а не убиваются все бактерии. Подсчет этих областей и умножение их на коэффициент разбавления позволило ему вычислить количество вирусов в оригинальной эмульсии. Фаги были объявлены в качестве потенциального средства для лечения таких заболеваний, как брюшной тиф и холера, однако их потенциал был забыт после открытия пенициллина. Изучение бактериофагов обеспечило понимание механизмов включения и выключения генов и полезный механизм для введения чужеродных генов в бактерии. К концу 19-го века, вирусы были определены с точки зрения их инфекционности, их способности быть отфильтрованными, и их потребности в живых хозяевах. Вирусы выращивали только в растениях и животных. В 1906 году Росс Гранвилл Харрисон изобрел метод выращивания ткани в лимфе, а в 1913 г. Е. Стейнхардт, С. Израели и Р. А. Ламберт использовали этот метод, чтобы вырастить вирус коровьей оспы во фрагментах ткани роговицы морских свинок. В 1928 году Мэйтланды вырастили вирус коровьей оспы в эмульсии рубленых почек куриц. Их метод не был широко принят до 1950 года, когда в больших масштабах выращивали вирус полиомиелита для производства вакцины. Другой прорыв произошел в 1931 году, когда американский патолог Эрнест Уильям Гудпасчер и Элис Майлз Вудрафф вырастили грипп и несколько других вирусов в оплодотворенных яйцах цыплят. В 1949 году Джон Франклин Эндерс, Томас Уэллер и Фредерик Роббинс вырастили вирус полиомиелита в культуре клетки эмбриона человека, это был первый вирус, выращенный без использования твердой животной ткани или яйца. Эта работа позволила Джонасу Солку изготовить эффективную вакцину против полиомиелита. 6) Первые изображения вирусов были получены после изобретения электронной микроскопии в 1931 году немецкими инженерами Эрнстом Руска и Максом Кноллом. В 1935 году американский биохимик и вирусолог Уэнделл Мередит Стэнли исследовал вирус табачной мозаики, и обнаружил, что он состоит в основном из белка. Через некоторое время, этот вирус был разделен на белок и РНК. Вирус табачной мозаики был первым вирусом, который был кристаллизован и, следовательно, его структуру можно исследовать в деталях. Первые изображения рентгенодифракции вируса были получены Берналом и Фанкученом в 1941 году. На основе своих фотографий, Розалинд Франклин обнаружила полную структуру вируса в 1955 г. В том же году, Хейнц Френкель-Конрат и Робли Уилльямс показали, что очищенная РНК вируса табачной мозаики и его белковая оболочка могут собраться самостоятельно, формируя функциональные вирусы, предполагая, что этот простой механизм, вероятно, служит в качестве средства, с помощью которого вирусы создаются внутри своих клеток-хозяев. 7) Вторая половина 20-го века – золотой век открытия вирусов. В эти годы было обнаружено большинство из более чем 2000 известных видов вирусов животных, растений и бактерий. В 1957 году были обнаружены лошадиный артеривирус и причина вируса бычьего поноса (пестивирус). В 1963 году Барух Блумберг обнаружил вирус гепатита В, а в 1965 году Говард Темин описал первый ретровирус. Ревертазам, фермент, который ретровирусы используют для создания ДНК-копий их РНК, впервые был описан в 1970 году Говардом Мартином Темином и Дэвидом Балтимором независимо друг от друга. В 1983 году команда Люка Монтанье из Института Пастера во Франции впервые выделила ретровирус, который теперь называется ВИЧ.

Происхождение

Вирусы встречаются везде, где есть жизнь, и, вероятно, существовали с того момента, когда живые клетки впервые эволюционировали. Происхождение вирусов не известно, поскольку они не образуют окаменелости, так что для сравнения ДНК или РНК вирусов были использованы молекулярные методы, что является полезным средством для исследования того, как они возникли. Кроме того, вирусный генетический материал может иногда интегрироваться в зародышевую линию организма хозяина, с помощью чего они могут передаваться вертикально потомству хозяина на протяжении многих поколений. Это обеспечивает бесценный источник информации для палеовирусологов, которые могут проследить происхождение древних вирусов, которые существовали миллионы лет назад. В настоящее время существует три основных гипотезы для объяснения происхождения вирусов:

Регрессивная гипотеза

Вирусы, возможно, когда-то были небольшими клетками, которые паразитировали большие клетки. С течением времени, гены, которые не требовались для паразитизма, были потеряны. Бактерии риккетсии и хламидии являются живыми клетками, которые, как и вирусы, могут размножаться только внутри клеток-хозяев. Они обеспечивают поддержку этой гипотезе, так как их зависимость от паразитизма, вероятно, привела к потере генов, что позволило им выжить вне клетки. Эта гипотеза также называется гипотеза вырождения, или гипотеза редукции. 8)

Гипотеза клеточного происхождения

Некоторые вирусы, возможно, эволюционировали из кусочков ДНК или РНК, которые «сбежали» из генов большего организма. Сбежавшая ДНК могла произойти от плазмид (кусочки голой ДНК, которые могут перемещаться между ячейками) или транспозонов (молекулы ДНК, которые копируют и передвигаются в различных позициях в генах клетки). Эти гены, ранее называемые «прыгающие гены», а сейчас –транспозоны, представляют собой примеры мобильных генетических элементов и могут быть предками некоторых вирусов. Барбара МакКлинток обнаружила эти гены в 1950 году в кукурузе. Эту гипотезу иногда называют гипотезой изменчивости, 9) или гипотезой побега.

Гипотеза коэволюции

Эта гипотеза также называется гипотезой первого вируса, и предполагает, что вирусы могли эволюционировать из сложных молекул белка и нуклеиновых кислот, в то же время, когда на Земле впервые появились клетки, и зависели от клеточной жизни в течение миллиардов лет. Вироиды представляют собой молекулы РНК, которые не классифицируются в качестве вирусов, потому что не имеют белковой оболочки. Тем не менее, они имеют характеристики, которые являются общими для нескольких вирусов и часто называются субвирусными агентами. Вироиды являются важными патогенами растений. Они не кодируют белки, но взаимодействуют с клеткой-хозяином и используют ее для репликации. Вирус гепатита человека дельта имеет РНК-геном, подобный вироидам, но имеет белковую оболочку, производную от вируса гепатита В и не может производить свою собственную оболочку. Таким образом, данный вирус является дефектным. Хотя геном вируса гепатита дельта может реплицироваться независимо, попав внутрь клетки-хозяина, для того, чтобы обеспечить вирусу белковую оболочку, чтобы передавать вирус на новые клетки, требуется помощь вируса гепатита В. Аналогичным образом, вирофаг спутник зависит от мимивируса, который заражает простейших Acanthamoeba castellanii. Вирусы, которые зависят от наличия других видов вируса в клетке-хозяине, называются спутниками, и могут быть эволюционными промежуточными звеньями между вироидами и вирусами. 10) В прошлом, ученые сталкивались с проблемами касательно всех вышеописанных гипотез: регрессивная гипотеза не объясняет, почему даже самые маленькие клеточные паразиты не похожи на вирусы. Гипотеза побега не объясняет сложные капсиды и другие структуры на вирусных частицах. Гипотеза первого вируса противоречит определению вирусов (о том, что они требуют наличия клеток-хозяев). В настоящее время, вирусы признаются в качестве древних, и считается, что они произошли до того, когда живые организмы разделилась на три домена. Это открытие привело к пересмотрению и переоценке этих трех классических гипотез. Доказательства предкового мира РНК клеток и компьютерный анализ последовательностей ДНК вируса и организма-хозяина обеспечивают более глубокое понимание эволюционных взаимоотношений между различными вирусами и могут помочь идентифицировать предков современных вирусов. На сегодняшний день, такие анализы не доказали, какая из этих гипотез верна. Тем не менее, представляется маловероятным, что все известные в настоящее время вирусы имеют общего предка, и вирусы, вероятно, возникали много раз в прошлом путем одного или нескольких механизмов. 11) Прионы – это инфекционные белковые молекулы, которые не содержат ДНК или РНК. Они могут вызывать инфекции, такие как скрепи у овец, коровья губчатая энцефалопатия («коровье бешенство») у крупного рогатого скота, а также хроническое истощение у оленей. У людей, прионовые заболевания включают куру, болезнь Крейтцфельда-Якоба и синдром Герстмана-Штраусслера-Шейнкера. Несмотря на то, что прионы принципиально отличаются от вирусов и вироидов, их открытие обеспечивает некоторое доверие к теории, что вирусы могли эволюционировать от самореплицирующихся молекул.

Микробиология

Свойства жизни

Не существует единого мнения по вопросу о том, являются ли вирусы формой жизни, или это – органические структуры, которые взаимодействуют с живыми организмами. Вирусы называют «организмами на краю жизни», так как они похожи на живые организмы тем, что они обладают генами, эволюционируют благодаря естественному отбору и размножаются путем создания нескольких копий самих себя через самосборку. Хотя у них есть гены, они не имеют ячеистой структуры, которая часто рассматривается в качестве основной единицы жизни. Вирусы не имеют своего собственного метаболизма, и для производства новых продуктов требуют наличия клетки-хозяина. Поэтому они не могут естественно размножаться вне клетки-хозяина, хотя виды бактерий, такие как риккетсии и хламидии, считаются живыми организмами, несмотря на такое же ограничение. Принятые формы жизни используют деление клеток для размножения, в то время как вирусы спонтанно собираются внутри клеток. Они отличаются от автономного роста кристаллов, поскольку они наследуют генетические мутации, будучи подверженными естественному отбору. Самосборка вирусов внутри клеток хозяина имеет значение для изучения происхождения жизни, поскольку она служит доказательством гипотезы о том, что жизнь могла начаться путем самосборки органических молекул.

Состав

Вирусы демонстрируют широкое разнообразие форм и размеров, называемых морфологией. В общем, вирусы намного меньше бактерий. Большинство вирусов, которые были изучены, имеют диаметр от 20 до 300 нанометров. Некоторые филовирусы имеют общую длину до 1400 нм; их диаметр составляет лишь около 80 нм. Большинство вирусов невозможно увидеть с помощью оптического микроскопа. Для визуализации вирионов используются сканирование и просвечивающая электронная микроскопия. Для того, чтобы увеличить контраст между вирусами и фоном, используются электронно-плотные «пятна». Они представляют собой растворы солей тяжелых металлов, таких как вольфрам, которые рассеивают электроны из участков, покрытых пятном. Когда вирионы покрыты пятнами (положительное окрашивание), мелкие детали затемняются. Негативное окрашивание позволяет преодолеть эту проблему путем окрашивания только фона. 12) Полная вирусная частица, известная как вирион, состоит из нуклеиновой кислоты, окруженной защитным слоем белка, называемого капсидом. Они образованы из идентичных белковых субъединиц, называемых капсомерами. Вирусы могут иметь липидную «оболочку», полученную из мембраны клетки-хозяина. Капсид состоит из белков, кодируемых геномом вируса, и его форма служит в качестве основы для морфологического различия. Вирально закодированные субъединицы белка будут самостоятельно собираться, формируя капсид, в общем случае, требуя наличия генома вируса. Сложные вирусы кодируют белки, которые помогают в строительстве их капсида. Белки, связанные с нуклеиновой кислотой, известны как нуклеопротеиды, и связь вирусных капсидных белков с вирусной нуклеиновой кислотой называется нуклеокапсидом. Капсид и вся структура вируса может механически (физически) зондироваться в ходе атомно-силовой микроскопии. В целом, существует четыре основных морфологических типа вируса:

Спиральный

Эти вирусы состоят из одного типа капсомера, сложенного вокруг центральной оси, образуя спиральную структуру, которая может иметь центральную полость или трубу. Такое расположение приводит к появлению палочковидных или нитевидных вирионов: они могут быть короткими и очень жесткими, или длинными и очень гибкими. Генетический материал, в общем, одноцепочечная РНК, или в некоторых случаях одноцепочечная ДНК, забивается в спираль белка путем взаимодействия между отрицательно заряженными нуклеиновыми кислотами и положительными зарядами на белке. В целом, длина спирального капсида связана с длиной нуклеиновой кислоты, содержащейся в нем, а его диаметр зависит от размера и расположения капсомеров. Хорошо изученный вирус табачной мозаики является примером спирального вируса.

Икосаэдральный

Большинство вирусов животных имеют икосаэдральную или почти сферическую форму с хиральной икосаэдрической симметрией. Обычный икосаэдр является оптимальным способом формирования замкнутой оболочки из идентичных субъединиц. Минимальное необходимое количество идентичных капсомеров – двенадцать, каждый из которых состоит из пяти идентичных субъединиц. Многие вирусы, такие как ротавирус, имеют более двенадцати капсомеров и сферическую форму, но они сохраняют эту симметрию. Капсомеры на верхушках окружены пятью другими капсомерами и называются пентоны. Капсомеры на треугольных гранях окружены шестью другими и называются гексонами. Гексоны, в сущности, плоские, а пентоны, образующие 12 вершин, изогнуты. Один и тот же белок может выступать в качестве субъединицы как пентамеров, так и гексамеров, или же они могут быть составлены из различных белков.

Вытянутый

Это икосаэдр, вытянутый вдоль оси, состоящей из пяти частей. Эта форма является общей при расположении головок бактериофагов. Эта структура состоит из цилиндра с крышкой на обоих концах.

Оболочечный

Некоторые виды вирусов окутывают себя в измененную форму одной из клеточных мембран, либо внешнюю мембрану, окружающую инфицированную клетку-хозяина, либо внутреннюю мембрану, такую как мембраны ядра или эндоплазматический ретикулум, таким образом, создавая внешний липидный бислой, известный как вирусная оболочка. Эта мембрана усеяна белками, кодируемыми геномом вируса и геномом хозяина; липидная мембрана сама по себе и любые углеводы берутся полностью из организма хозяина. Вирус гриппа и ВИЧ используют эту стратегию. Инфективность большинства оболочечных вирусов зависят от их оболочки. 13)

Сложный

Эти вирусы обладают капсидом, который не имеет ни чисто спиралевидной, ни чисто икосаэдрической формы, и могут обладать дополнительными структурами, такие как белковые хвосты или сложная внешняя стенка. Некоторые бактериофаги, такие как энтеробактерия фага Т4, имеют сложную структуру, состоящую из икосаэдрической головки, связанной со спиралевидным хвостом, который может иметь шестиугольную опорную пластину с выступающими белковыми отростками. Эта хвостовая структура действует как молекулярный шприц, приложенный к бактериальному хозяину, а затем вводящий вирусный геном в клетку. Поксвирусы – это большие, сложные вирусы, которые имеют необычную морфологию. Вирусный геном связывается с белками в пределах центральной дисковой структуры, известной как нуклеоид. Нуклеоид окружен мембраной и двумя боковыми телами с неизвестными функциями. Вирус имеет внешнюю оболочку с толстым слоем белка по его поверхности. Весь вирион слегка плейоморфный, и имеет форму от яйцевидной до кирпичной. Мимивирус является одним из крупнейших охарактеризованных вирусов, с диаметром капсида 400 нм. Белковые нити размером 100 нм тянутся с его поверхности. Капсид имеет гексагональную форму под электронным микроскопом, поэтому капсид, вероятно, имеет икосаэдральную форму. В 2011 году исследователи обнаружили в пробах воды, собранных с морского дна у берегов Лас-Крусес, Чили, самый большой из известных вирусов. Ориентировочно его назвали Megavirus chilensis. Вирус можно наблюдать при помощи обычного оптического микроскопа. В 2013 году в Чили и Австралии был открыт род Pandoravirus, и его геномы примерно вдвое больше, чем у мегавируса и мимивируса. Некоторые вирусы, которые инфицируют археи, имеют сложные структуры, которые не связаны с какой-либо другой формой вируса, с широким разнообразием необычных форм, начиная от веретенообразных структур, до вирусов, напоминающих крючоватые прутки, слезинки или даже бутылки. Другие архейные вирусы похожи на хвостатых бактериофагов, и могут иметь несколько хвостовых структур. 14)

Геном

Среди вирусных видов существует огромное разнообразие геномных структур; в качестве группы, они имеют большее структурное геномное разнообразие, чем растения, животные, археи или бактерии. Существуют миллионы различных типов вирусов, хотя подробно было описано только около 5000 видов. По состоянию на сентябрь 2015 года, в базе данных вирусных геномов NCBI содержится более 75000 полных последовательностей генома, но, без сомнения, многие геномы еще предстоит открыть. Вирус имеет ДНК или РНК-геном и называется соответственно ДНК-вирусом или РНК-вирусом. Подавляющее большинство вирусов имеют РНК-геномы. Вирусы растений, как правило, имеют одноцепочечные РНК геномы, а бактериофаги, как правило, имеют двухцепочечные ДНК геномы. Вирусные геномы имеют круглую форму, как и полиомавирусы, или линейную, как аденовирусы. Тип нуклеиновой кислоты не имеет никакого отношения к форме генома. Среди РНК-содержащих вирусов и некоторых ДНК-содержащих вирусов, геном часто делится на отдельные части, и в этом случае он называется сегментированным. В случае РНК-содержащих вирусов, каждый сегмент часто кодирует только один белок, и они, как правило, встречаются вместе в одном капсиде. Тем не менее, для того, чтобы вирус был заразным, не требуется, чтобы все сегменты были в том же вирионе, что и вирус, как было продемонстрировано в случае мозаичного вируса костреца и нескольких других вирусах растений. Вирусный геном, независимо от типа нуклеиновой кислоты, почти всегда является одноцепочечным или двухцепочечным. Одноцепочечные геномы состоят из непарной нуклеиновой кислоты, аналогично половине лестницы, разделенной пополам. Двухцепочечные геномы состоят из двух дополнительных спаренных нуклеиновых кислот, аналогичных лестнице. Вирусные частицы некоторых семейств вирусов, таких, как вирусы, принадлежащие к семейству Hepadnaviridae, содержат геном, который является частично двухцепочечным и частично – одноцепочечным. У большинства вирусов с РНК-геномом и некоторых вирусов с одноцепочечными ДНК геномами, отдельные нити называются либо положительно-полярными (так называемые плюс-нити), либо отрицательно-полярными (так называемые минус-нити), в зависимости от того, являются ли они комплементарными по отношению к РНК вирусного мессенджера (мРНК). Положительно-полярный РНК вируса находится в той же полярности, что и вирусная мРНК, и, таким образом, по крайней мере, часть ее может быть немедленно транслирована с помощью клетки-хозяина. Отрицательно-полярная вирусная РНК является комплементарной по отношению к мРНК и, следовательно, должна быть преобразована в положительно-полярную РНК с помощью РНК-зависимой РНК-полимеразы перед трансляцией. Номенклатура ДНК для вирусов с однополярной геномной оцДНК подобна номенклатуре РНК, в том смысле, что цепи матрицы для вирусной мРНК являются дополнением к ней (-), и кодирующая цепь является её копией (+). Тем не менее, несколько типов оцДНК и оцРНК вирусов, имеющих геномы, которые амбиполярны в этой транскрипции, могут происходить от обеих нитей в двухцепочечном репликативном промежуточном продукте. Примеры включают геминивирусы, которые являются оцДНК вирусами растений, и аренавирусы, которые являются оцРНК вирусами животных. 15) Размер генома сильно отличается у разных видов. Самые маленькие вирусные геномы – оцДНК цирковирусы, семья Circoviridae – кодируют только два белка и имеют размер генома только две тысячи нуклеотидов; наибольшие вирусы – пандоравирусы – имеют геномные размеры около двух миллионов пар оснований, которые кодируют около 2500 белков. В общем, РНК-вирусы имеют меньшие размеры генома, чем ДНК-вирусы из-за большего количества ошибок при репликации, и имеют максимальный верхний предел размера. Помимо этого предела, ошибки в геноме при репликации делают вирус бесполезным или неконкурентоспособным. Чтобы компенсировать это, РНК-вирусы часто имеют сегментированные геномы – геном разбивается на более мелкие молекулы, тем самым снижая вероятность того, что ошибка в однокомпонентном геноме выведет из строя весь геном. В отличие от этого, ДНК-вирусы, как правило, имеют большие геномы из-за высокой точности их ферментов репликации. Одноцепочечные ДНК-вирусы являются исключением из этого правила, так как частота мутаций для этих геномов может приблизиться к крайности вирусного случая оцРНК. 16)

Генетическая мутация

Вирусы подвергаются генетическим изменениям несколькими механизмами. Они включают в себя процесс, называемый антигенный дрейф, когда отдельные основания в ДНК или РНК мутируют в другие основания. Большинство этих точечных мутаций являются «тихими» - они не меняют белка, который кодирует ген. Но другие мутации могут обеспечивать эволюционные преимущества, такие как устойчивость к противовирусным препаратам. Антигенный сдвиг происходит, когда есть значительные изменения в геноме вируса. Это может быть результатом рекомбинации. Когда это происходит с вирусами гриппа, может развиться пандемия. РНК-вирусы часто существуют в виде квазиразновидностей или массы вирусов одного и того же вида, но с немного разными нуклеозидными последовательностями генома. Такие квазивиды являются главной мишенью для естественного отбора. Сегментированные геномы придают эволюционные преимущества; различные штаммы вируса с сегментированным геномом могут комбинировать гены и производить вирусное потомство с уникальными характеристиками. Это называется рекомбинацией или вирусным сексом. 17) Генетическая рекомбинация – процесс, с помощью которого цепь ДНК разрывается, а затем присоединяется к концу другой молекулы ДНК. Это может произойти, когда вирусы заражают клетки одновременно. Исследования вирусной эволюции показывают, что рекомбинация была распространена в изученных видах вирусов. Рекомбинация распространена среди РНК и ДНК вирусов.

Цикл репликации

Вирусные популяции не увеличиваются путем деления клеток, потому что они являются бесклеточными. Вместо этого они используют устройство и метаболизм клетки-хозяина для получения нескольких копий самих себя, и собираются в клетку. Жизненный цикл вирусов сильно отличается между видами, однако существует шесть основных этапов жизненного цикла вируса:

Приложение – это специфическое связывание между вирусными капсидными белками и специфическими рецепторами на поверхности клетки-хозяина. Эта специфика определяет круг хозяев вируса. Например, ВИЧ инфицирует ограниченный спектр человеческих лейкоцитов. Это происходит потому, что его поверхностный белок, gp120, специфически взаимодействует с молекулой CD4 – рецептором хемокина – который наиболее часто встречается на поверхности CD4 + Т-клеток. Этот механизм развился в пользу тех вирусов, которые заражают только клетки, в которых они способны к репликации. Приложение к рецептору может вызвать изменения вирусной белковой оболочки, которые приводят к слиянию вирусных и клеточных мембран, или изменения безоболочечных белков поверхноси вируса, которые позволяют вирусу войти.

Проникновение следует за прикреплением: вирионы проникают в клетку-хозяина с помощью опосредованного рецепторами эндоцитоза или слияния мембран. Это явление часто называют проникновением вируса. Инфицирование растений и клеток грибов отличается от инфицирования животных клеток. Растения имеют жесткую клеточную стенку из целлюлозы, и грибы имеют стенку из хитина, поэтому большинство вирусов могут проникнуть внутрь этих клеток только после повреждения клеточной стенки. 18) Тем не менее, почти все вирусы растений (например, вирус табачной мозаики) могут также переходить непосредственно от клетки к клетке, в виде одноцепочечных нуклеопротеидных комплексов, через поры, называемые плазмодесмами. Бактерии, как и растения, имеют сильные клеточные стенки, которые вирус должен повредить, чтобы заразить клетку. Тем не менее, если учесть, что бактериальные клеточные стенки имеют значительно меньшую толщину, чем клеточные стенки растений из-за их намного меньшего размера, некоторые вирусы развили механизмы, которые вводят их геном в бактериальную клетку через клеточную стенку, в то время как вирусный капсид остается снаружи.

«Раздевание» (сбрасывание оболочки вируса) представляет собой процесс, в котором удаляется вирусный капсид: это может осуществляться путем деградации под действием вирусных ферментов или ферментов хозяина, или путем простой диссоциации; конечным результатом является освобождение вирусной геномной нуклеиновой кислоты.

Репликация вирусов включает в себя, в первую очередь, преумножение генома. Репликация включает в себя синтез вирусной РНК (мРНК) из «ранних» генов (с исключениями для вирусов с положительно-полярной РНК), синтез вирусного белка, возможную сборку вирусных белков. Репликация вирусного генома опосредована ранней или регуляторной экспрессией белка. После этого может последовать, для сложных вирусов с более крупными геномами, еще один или больше циклов синтеза мРНК: «поздняя» экспрессия гена, в общем, структурных или вирионовых белков.

Сборка – после опосредованной структурой самосборки вирусных частиц, часто происходит некоторая модификация белков. У таких вирусов, как ВИЧ, эта модификация (иногда называемая созреванием) происходит после того, как вирус выпускается из клетки-хозяина.

Высвобождение – вирусы могут быть высвобождены из клетки-хозяина в ходе лизиса, процесса, который убивает клетку путем разрыва ее мембраны и клеточной стенки, если она присутствует: это особенность многих бактериальных вирусов и некоторых вирусов животных. Некоторые вирусы подвергаются лизогенному циклу, в котором вирусный геном включается путем генетической рекомбинации в определенное место в хромосому хозяина. Вирусный геном в этом случае называется «провирусом», или, в случае бактериофагов, «профагом». Каждый раз, когда клетка-хозяин делится, вирусный геном также реплицируется. Вирусный геном, в основном, «молчит» в хозяине. Тем не менее, в какой-то момент, провирус или профаг может привести к возникновению активного вируса, который может вызвать лизис клеток-хозяев. Оболочечные вирусы (например, ВИЧ), как правило, освобождаются от клетки-хозяина путем почкования. В ходе этого процесса, вирус приобретает оболочку, которая представляет собой модифицированный фрагмент плазмы хозяина или другой, внутренней, мембраны. Генетический материал в пределах вирусных частиц, и способ, с помощью которого материал реплицируется, значительно варьируется между различными типами вирусов.

ДНК-содержащие вирусы

Репликация генома большинства вирусов ДНК происходит в ядре клетки. Если на поверхности клетки имеется соответствующий рецептор, эти вирусы проникают в клетки иногда путем прямого слияния с клеточной мембраной (например, вирусы герпеса), или чаще – путем рецептор-опосредованного эндоцитоза. Большинство вирусов ДНК полностью зависят от ДНК клетки-хозяина и аппарата, синтезирующего РНК и аппарата, обрабатывающего РНК. Однако, вирусы с более крупными геномами могут кодировать большую часть самих этих аппаратов. У эукариот, вирусный геном должен пересекать ядерную мембрану клетки для доступа к этим аппаратам, в то время как у бактерий ему требуется только войти в клетку.

РНК-вирусы Репликация обычно происходит в цитоплазме. РНК-вирусы могут быть помещены в четыре различных группы, в зависимости от способа их репликации. Полярность (может ли он быть использован непосредственно рибосомами для производства белков) вирусов с одноцепочечной РНК в значительной степени определяет репликативный механизм; другим основным критерием является одноцепочечный или двухцепочечный генетический материал. Все РНК-вирусы используют свои собственные ферменты РНК репликазы для создания копий их геномов.

Вирусы с обратным транскрибированием Они имеют оцРНК (Retroviridae, Metaviridae, Pseudoviridae) или дцДНК (Caulimoviridae и Hepadnaviridae) в своих частицах. Вирусы с обратной транскрипцией с РНК геномами (ретровирусы) используют для репликации промежуточный продукт ДНК, в то время как вирусы с геномами ДНК (параретровирусы) используют промежуточный продукт РНК во время репликации генома. Оба типа используют обратную транскриптазу, или РНК-зависимую ДНК-полимеразу, чтобы осуществить преобразование нуклеиновой кислоты. Ретровирусы интегрируют ДНК, полученную с помощью обратной транскрипции в геном хозяина, как провирус в качестве составной части процесса репликации; параретровирусы не делают такого, хотя интегрированные копии генома, особенно растительных параретровирусов, могут привести к созданию инфекционного вируса. Они чувствительны к противовирусным препаратам, которые ингибируют фермент обратной транскриптазы, например, зидовудину и ламивудину. Примером первого типа является ВИЧ, который является ретровирусом. Примером второго типа являются Hepadnaviridae, которые включают в себя вирус гепатита.

Воздействие на клетку-хозяина

Диапазон структурных и биохимических эффектов, которые вирусы оказывают на клетку-хозяина, весьма обширен. Они называются цитопатическим эффектом. Большинство вирусных инфекций, в конечном итоге, приводят к гибели клетки-хозяина. Причины смерти включают в себя лизис клеток, изменения мембраны клеточной поверхности и апоптоз клетки. Часто гибель клеток вызывается прекращением их нормальной деятельности из-за подавления вирус-специфическими белками, не все из которых являются компонентами вирусной частицы. 19) Некоторые вирусы не вызывают видимых изменений в зараженной клетке. Клетки, в которых вирус латентен и неактивен, показывают некоторые признаки инфекции и часто функционируют нормально. Это вызывает хронические инфекции и вирус часто находится в состоянии покоя в течение многих месяцев или лет. Это часто бывает с вирусами герпеса. Некоторые вирусы, такие как вирус Эпштейна-Барр, могут привести к размножению клеток, без развития злокачественных опухолей, в то время как другие, такие как папилломы, устанавливаются в качестве причины рака.

Круг хозяев

Вирусы являются на сегодняшний день наиболее распространенными биологическими единицами на Земле, и они превосходят по количеству все остальные единицы вместе взятые. Они заражают все виды клеточной жизни, включая животных, растения, бактерии и грибы. Тем не менее, различные типы вирусов могут инфицировать только ограниченный круг хозяев и многие из них – только конкретные виды живых организмов. Некоторые из них, такие как вирус оспы, например, могут заражать только один вид – в этом случае человека, и, как говорят, имеют узкий круг хозяев. Другие вирусы, такие как вирус бешенства, могут заражать различные виды млекопитающих, то есть, имеют широкий круг хозяев. Вирусы, которые заражают растения, безвредны для животных, и большинство вирусов, которые заражают других животных, безвредны для человека. Круг хозяев некоторых бактериофагов ограничивается одним штаммом бактерий, и они могут быть использованы для отслеживания источника вспышек инфекций с помощью метода, называемого фаготипирование. 20)

Классификация

Классификация призвана описать разнообразие вирусов путем их наименования и группировки на основе сходства. В 1962 году, Андре Львов, Роберт Хорн и Пол Турнье впервые разработали средства для классификации вирусов, на основе линнеевской иерархической системы. Эта система баз классификации по типу, классу, порядку, семье, роду и виду. Вирусы были сгруппированы в соответствии с их общими свойствами (а не свойствами их хозяев) и типу нуклеиновой кислоты, образующей их геномы. Позже был создан Международный комитет по таксономии вирусов. Тем не менее, вирусы не классифицируются на основе типа или класса, так как их малый размер генома и высокий уровень мутаций затрудняет определение их происхождения за пределами данного порядка. Таким образом, в дополнение к более традиционной иерархии используется классификация вирусов по Балтимору.

Классификация ICTV

Международный комитет по таксономии вирусов (ICTV) разработал текущую систему классификации и руководящие принципы, которые уделяют большее значение некоторым свойствам вирусов для поддержания однородности семьи. Была создана единая таксономия (универсальная система для классификации вирусов). 9-й отчет lCTV определяет понятие вирусных видов как самый низкий таксон (группу) в виде разветвленной иерархии вирусных таксонов. Тем не менее, в настоящее время изучена только небольшая часть от общего разнообразия вирусов, при этом анализ проб человека показал, что около 20% вирусных последовательностей не наблюдались раньше, и образцы из окружающей среды, например, от морской воды и океанских отложений, показывают, что значительное большинство последовательностей полностью новые. Общая таксономическая структура выглядит следующим образом:

  • Порядок (-virales)
  • Семейство (-viridae)
  • Подсемейство (-virinae)
  • Род (-virus)
  • Вид (-virus)

В текущей (2013 г.) систематике ICTV, было установлено 7 порядков – Caudovirales, Herpesvirales, Ligamenvirales, Mononegavirales, Nidovirales, Picornavirales и Tymovirales. Комитет формально не различает подвиды, штаммы и изоляты. В общей сложности насчитывается 7 порядков, 103 семьи, 22 подсемейства, 455 родов, около 2827 видов и более 4000 видов еще не включено. 21)

Классификация по Балтимору

Нобелевский лауреат, биолог Дэвид Балтимор, разработал систему классификации по Балтимору. В современной классификации вирусов, система классификации ICTV используется в сочетании с системой классификации по Балтимору. Классификация вирусов по Балтимору основана на механизме производства мРНК. Вирусы должны генерировать мРНК от их геномов для производства белков и размножаться, но для достижения этой цели в каждой вирусной семье используются различные механизмы. Вирусные геномы могут быть одноцепочечными (оц) или двухцепочечными (дц), РНК или ДНК, и могут или не могут использовать обратную транскриптазу (ОТ). Кроме того, вирусы оцРНК могут быть либо положительными (+), либо антисмысловыми (-). По этой классификации, вирусы делятся на семь групп:

  • I: дцДНК вирусы (например, аденовирусы, герпесвирусы, поксвирусы)
  • II: оцДНК вирусы (+ цепь) ДНК (например, парвовирусы)
  • III: дцРНК вирусы (например, реовирусы)
  • IV: (+) оцРНК вирусы (+ цепь) РНК (например, пикорнавирусы, тогавирусы)
  • V: (-) оцРНК вирусы (- цепь или антисмысловые) РНК (например, ортомиксовирусы, рабдовирусы)
  • VI: вирусы оцРНК-ОТ (+ цепь) РНК с ДНК промежуточным продуктом в жизненном цикле (например, ретровирусы)
  • VII: вирусы дц-ОТ (например, Hepadnaviruses)

В качестве примера классификации вирусов, вирус ветряной оспы принадлежит к порядку Herpesvirales, семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesvirinae и роду Varicellovirus. Этот вирус входит в группу I по классификации Балтимора, потому что это вирус дцДНК, который не использует обратную транскриптазу.

Роль в болезнях человека

Примеры распространенных заболеваний человека, вызываемых вирусами, включают простуду, грипп, ветрянку и герпес. Многие серьезные заболевания, такие как вирус Эбола, СПИД, птичий грипп и ОРВИ, вызываются вирусами. Относительная способность вирусов вызывать заболевания описывается в терминах вирулентности. Исследуется, имеют ли другие заболевания вирусный возбудитель, например, возможная связь между человеческим вирусом герпеса 6 (HHV6) и неврологическими заболеваниями, такими как рассеянный склероз и синдром хронической усталости. Существуют споры относительно того, может ли борнавирус, который ранее считался причиной неврологических заболеваний у лошадей, отвечать за развитие психических заболеваний у человека. 22) Вирусы имеют различные механизмы, с помощью которых они производят болезни в организме, что во многом зависит от вирусных видов. Механизмы на клеточном уровне, прежде всего, включают в себя лизис клеток, вскрытие и последующую гибель клетки. У многоклеточных организмов, если умирает достаточное количество клеток, весь организм начинает страдать от последствий. Хотя вирусы вызывают разрушение здорового гомеостаза, что приводит к болезни, они могут существовать в организме относительно безвредно. Примером может быть способность вируса простого герпеса, который вызывает герпес, оставаться в состоянии покоя в человеческом теле. Это называется задержкой и является характеристикой вирусов герпеса, включая вирус Эпштейна-Барр, который вызывает воспаление гланд, и вирус ветряной оспы, который вызывает ветряную оспу и опоясывающий лишай. Большинство людей были инфицированы, по крайней мере, одним из этих типов вируса герпеса. Тем не менее, эти латентные вирусы могут иногда быть полезными, поскольку наличие вируса может повысить иммунитет против бактериальных патогенов, таких как чумная палочка. Некоторые вирусы могут вызывать пожизненные или хронические инфекции, при которых вирусы продолжают размножаться в организме, несмотря на защитные механизмы хозяина. Это часто встречается в случае инфекций вируса гепатита В и вируса гепатита С. Люди с хронической инфекцией называются носителями, так как они служат в качестве резервуаров инфекционного вируса. В популяциях с высокой долей носителей, болезнь считается эндемичной. 23)

Эпидемиология

Вирусная эпидемиология является отраслью медицинской науки, которая занимается изучением передачи и контроля вирусных инфекций у людей. Передача вирусов может быть вертикальной, то есть, от матери к ребенку, или горизонтальной, то есть, от человека к человеку. Примеры вертикальной передачи включают вирусы гепатита В и ВИЧ, когда ребенок рождается уже инфицированный вирусом. Другим, более редким, примером является вирус ветряной оспы, который, хотя и влечет за собой относительно легкие инфекции в организме человека, может быть смертельным для плода и новорожденного ребенка. Горизонтальная передача является наиболее распространенным механизмом распространения вирусов в популяциях. Передача может произойти, когда люди обмениваются жидкостями организма во время сексуальной активности, например, ВИЧ; обменивается кровь при переливании инфицированной крови или при совместном использовании игл, например, гепатит С; при обмене слюны во рту, например, вирус Эпштейна-Барра; попадание в организм загрязненной пищи или воды, например, норовирус; вдыхание аэрозолей, содержащих вирионы, например, вирус гриппа; и проникновение векторов насекомых, таких как комары, в кожу хозяина, например, лихорадка денге. Скорость передачи вирусных инфекций зависит от ряда факторов, которые включают в себя плотность населения, число восприимчивых лиц, (т.е. лиц, не обладающих иммунитетом), качество медицинской помощи и погодные условия. Эпидемиология используется для разрыва цепи инфекции в популяции во время вспышек вирусных заболеваний. Также используются меры контроля, которые основаны на знании того, как передается вирус. Важно найти источник или источники, вспышки болезни и идентифицировать вирус. После того как вирус был идентифицирован, цепь передачи иногда может быть нарушена при помощи вакцин. Если вакцины не доступны, санитария и дезинфекция могут быть эффективными мерами. Часто инфицированные люди изолируются от остальной части общества, а люди, которые подверглись воздействию вируса, помещаются на карантин. Для того, чтобы контролировать вспышки ящура у крупного рогатого скота в Великобритании в 2001 году, были убиты тысячи единиц крупного рогатого скота. Большинство вирусных инфекций человека и других животных имеют инкубационные периоды, в течение которых инфекция не вызывает каких-либо признаков или симптомов. Инкубационный период у вирусных заболеваний колеблется от нескольких дней до нескольких недель. 24) Иногда совпадая с инкубационным периодом, но чаще следуя после него, наступает период передаваемости – время, когда зараженный человек или животное является заразным и может заразить другого человека или животное. Продолжительность этого периода также известна для многих вирусных инфекций. Знание продолжительности обоих периодов играет важную роль в борьбе со вспышками заболеваний. Если вспышки вызывают необычно высокий процент случаев в популяции, сообществе или регионе, они называются эпидемиями. Если вспышки распространяются по всему миру, они называются пандемией.

Эпидемии и пандемии

Индейские населения были уничтожены эпидемиями заразных болезней, в частности, оспы, привезенных в Америку европейскими колонистами. Пока неясно, сколько коренных американцев было убито после прибытия Колумба в Северную и Южную Америки иностранными болезнями, но, по оценкам, количество жертв составило около 70%. Ущерб, нанесенный этой болезнью, значительно способствовал европейским завоеваниям коренного населения. Пандемия – это эпидемия всемирного масштаба. Пандемия гриппа 1918 года, которая продолжалась до 1919 года, была пандемией гриппа категории 5, вызванной необычайно тяжелым и смертельным вирусом гриппа. Жертвами часто были здоровые молодые люди, в отличие от большинства вспышек гриппа, которые преимущественно влияют на несовершеннолетних, престарелых, или иным образом ослабленных пациентов. По более ранним оценкам, умерло 40-50 миллионов человек, в то время как более поздние исследования показывают, что пандемия, возможно, убила целых 100 миллионов человек, или 5% населения мира в 1918 г. Большинство исследователей считают, что ВИЧ возник в странах Африки к югу от Сахары в 20-м веке; в настоящее время ВИЧ принял масштабы пандемии. По оценкам, 38,6 миллиона человек живут с этим заболеванием во всем мире. Объединенная программа Организации Объединенных Наций по ВИЧ / СПИДу (ЮНЭЙДС) и Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) подсчитали, что СПИД унес жизни более 25 миллионов человек, так как он был впервые обнаружен 5 июня 1981 года, что делает его одним из самых разрушительных эпидемических заболеваний в истории человечества. В 2007 году, было зафиксировано 2,7 миллиона новых случаев ВИЧ-инфекций и 2 миллиона смертей в связи с ВИЧ. Несколько весьма летальных вирусных патогена являются членами семейства филовирусов. Филовирусы являются нитевидными вирусами, которые вызывают вирусную геморрагическую лихорадку, и включают в себя эболавирусы и марбургвирусы. Вирус Марбург, впервые обнаруженный в 1967 году, привлек к себе широкое внимание прессы в апреле 2005 года во время вспышки в Анголе. 25) Вирус Эбола также вызывает периодические вспышки с высокими показателями смертности с 1976 года, когда он впервые был идентифицирован. Самой худшей, и последней, из них, является эпидемия в Западной Африке.

Рак

Вирусы являются установленной причиной рака у людей и других видов живых организмов. Вирусные виды рака встречаются только у меньшинства инфицированных лиц (или животных). Вирусы рака входят в различные семейства вирусов, включая РНК и ДНК вирусы, и поэтому не существует единого типа «онковируса» (устаревший термин, первоначально используемый для обозначения остро трансформирующих ретровирусов). Развитие рака определяется различными факторами, такими как иммунитет хозяина и мутации в организме хозяина. Вирусы, вызывающие злокачественные опухоли у человека, включают в себя некоторые генотипы вируса папилломы человека, вируса гепатита В, вируса гепатита С, вируса Эпштейна Барр, вирус герпеса, ассоциированный с саркомой Капоши, и Т-лимфотропный вирус человека. Наиболее недавно обнаруженный вирус рака человека является полиомавирусом (полиомавирус клетки Меркеля), который вызывает большинство случаев редкой формы рака кожи под названием карцинома Меркеля. Вирусы гепатита могут перерасти в хронические вирусные инфекции, приводящие к раку печени. Инфекция T-лимфотропным вирусом человека может привести к тропическому спастическому парапарезу и взрослому Т-клеточному лейкозу. Вирусы папилломы человека являются установленной причиной рака шейки матки, кожи, ануса и полового члена. В пределах герпесвирусов, саркома-ассоциированный вирус герпеса Капоши вызывает саркому Капоши и лимфому полости тела, а вирус Эпштейна-Барр вызывает лимфому Беркитта, лимфому Ходжкина, B лимфопролиферативные расстройства и карциному носоглотки. Полиомавирусы клеток Меркель тесно связаны с SV40 и полиомавирусами мышей, которые были использованы в качестве моделей животных на наличие вирусов рака на протяжении более 50 лет.

Защитные механизмы хозяина

Первой линией защиты организма от вирусов является врожденная иммунная система, включающая в себя клетки и другие механизмы, которые защищают хозяина от инфекции неспецифическим образом. Это означает, что клетки врожденной системы распознают и реагируют на патогенные микроорганизмы в общем виде, но, в отличие от адаптивной иммунной системы, врожденный иммунитет не дает долгосрочного или защитного иммунитета. РНК-интерференция является важным средством врожденной защиты от вирусов. Многие вирусы имеют стратегии репликации, которые включают двухцепочечную РНК (дцРНК). Когда такой вирус заражает клетку, он выпускает свою молекулу или молекулы РНК, которые сразу же связываются с белковым комплексом, называемым дайсер, что вызывает деление РНК на более мелкие куски. Биохимический путь – комплекс RISC, активируется, что обеспечивает выживание клеток путем разрушения вирусной мРНК. Ротавирусы эволюционировали, чтобы избежать этого механизма защиты, полностью сбрасывая оболочку внутри клетки, и отпуская вновь образующуюся мРНК через поры во внутреннем капсиде частицы. Их геномная дцРНК остается защищенной внутри ядра вириона. Когда адаптивная иммунная система позвоночного встречает вирус, она производит специфические антитела, которые связываются с вирусом и часто делают его неинфекционным. Это называется гуморальный иммунитет. Важное значение имеют два типа антител. Первый из них, называемый IgM, является весьма эффективным в отношении нейтрализации вирусов, но производится клетками иммунной системы только в течение нескольких недель. Второй, называемый IgG, производится в течение неопределенного срока. Наличие IgM в крови хозяина используется для проверки острой инфекции, в то время как IgG указывает на инфекцию в прошлом. IgG антитела измеряются, когда проводятся испытания на наличие иммунитета. 26) Антитела могут продолжать быть эффективным механизмом защиты даже после того, как вирусам удастся получить доступ к клетке-хозяину. Белок, который находится в клетках, называется TRIM21, и может присоединяться к антителам на поверхности вирусной частицы. Это запускает последующее уничтожение вируса ферментами системы протеосомы клетки. Вторая защита позвоночных против вирусов называется клеточным иммунитетом и включает в себя иммунные клетки, известные как Т-клетки. Клетки организма постоянно демонстрируют короткие фрагменты своих белков на поверхности клетки, и, если Т-клетка распознает там подозрительный вирусный фрагмент, клетка-хозяин разрушается клеткой-убийцей Т, и пролиферируют вирус-специфические Т-клетки. Клетки, такие как макрофаги, являются специалистами в области этой презентации антигена. Производство интерферона является важным механизмом защиты хозяина. Это гормон, вырабатываемый организмом, если в нем присутствуют вирусы. Его роль в иммунитете сложна; он, в конечном итоге, останавливает размножение вирусов, убивая инфицированные клетки и их ближайших соседей. Не все вирусные инфекции производят защитный иммунный ответ, таким образом. ВИЧ обходит иммунную систему, постоянно изменяя последовательность аминокислот белков на поверхности вириона. Это известно как «избегающая мутация», поскольку вирусные эпитопы избегают узнавания иммунной системой хозяина. Эти стойкие вирусы избегают иммунного контроля путем секвестрации, блокады презентации антигена, сопротивления цитокина, уклонения от деятельности естественных клеток-киллеров, уклонения от апоптоза, и антигенного сдвига. Другие вирусы, называемые нейротропными вирусами, распространяются с помощью нейронного распространения, когда иммунная система может быть не в состоянии их достигнуть.

Профилактика и лечение

Поскольку вирусы используют жизненно важные метаболические пути внутри клеток хозяина для репликации, их трудно устранить без применения лекарственных средств, которые вызывают токсические эффекты по отношению к клеткам-хозяевам в целом. Наиболее эффективными медицинскими подходами к лечению вирусных заболеваний являются прививки, обеспечивающие иммунитет к инфекции, а также противовирусные препараты, которые избирательно вмешиваются в вирусную репликацию.

Вакцины

Вакцинация является дешевым и эффективным способом предотвращения заражения вирусами. Вакцины были использованы для предотвращения вирусных инфекций задолго до открытия реальных вирусов. Их использование привело к резкому снижению заболеваемости и смертности, связанных с вирусными инфекциями, такими как полиомиелит, корь, эпидемический паротит и краснуха. Инфекция оспой была ликвидирована. Существуют вакцины для предотвращения более тринадцати вирусных инфекций людей, и больше – для профилактики вирусных инфекций у животных. Вакцины могут состоять из живых ослабленных или убитых вирусов или вирусных белков (антигенов). Живые вакцины содержат ослабленные формы вируса, который не вызывает заболевание, но, тем не менее, дает иммунитет. Такие вирусы называются ослабленными. Живые вакцины могут быть опасны, если давать их людям со слабым иммунитетом (с иммунодефицитом), потому что у этих людей, ослабленный вирус может вызвать настоящее заболевание. Методы биотехнологии и генной инженерии используются для производства субъединичных вакцин. Эти вакцины используют только белки капсида вируса. Вакцина против гепатита В является примером этого типа вакцины. Субъединичные вакцины безопасны для пациентов с ослабленным иммунитетом, так как они не могут вызывать заболевание. Вакцина вируса желтой лихорадки, живой-ослабленный штамм, называемая 17D, вероятно, является самой безопасной и наиболее эффективной вакциной среди когда-либо созданных.

Противовирусные препараты

Противовирусные препараты часто являются аналогами нуклеозидов (поддельные строительные блоки ДНК), которые вирусы ошибочно включают в свои геномы во время репликации. Жизненный цикл вируса затем останавливается, потому что вновь синтезированная ДНК является неактивной. Это происходит потому, что эти аналоги не имеют гидроксильных групп, которые, наряду с атомами фосфора, связываются вместе, формируя сильный «стержень» молекулы ДНК. Это называется обрывом цепи ДНК. 27) Примеры нуклеозидных аналогов – ацикловир для лечения инфекций вируса простого герпеса и ламивудин для лечения вирусных инфекций ВИЧ и гепатита B. Ацикловир является одним из старейших и наиболее часто назначаемых противовирусных препаратов. Другие противовирусные препараты нацелены на разные стадии жизненного цикла вируса. Для того, чтобы стать полностью инфекционным, ВИЧ зависит от протеолитического фермента ВИЧ-1 протеазы. Существует большой класс препаратов – ингибиторы протеазы, которые инактивируют этот фермент. Гепатит С вызывается РНК-вирусом. У 80% инфицированных людей, заболевание носит хронический характер, и при отсутствии лечения, эти люди остаются инфицированными всю оставшуюся жизнь. Тем не менее, в настоящее время существует эффективное средство, которое использует аналог нуклеозидов – препарат рибавирин, в сочетании с интерфероном. Было разработано лечение хронических носителей вируса гепатита В с помощью подобной стратегии с использованием ламивудина.

Инфекция у других видов

Вирусы заражают всех клеточных организмов и, хотя вирусы встречаются повсеместно, каждый вид клеточных организмов имеет свой собственный специфический диапазон, который часто заражает только эти виды. Некоторые вирусы, называемые спутники, могут реплицироваться только в клетках, которые уже были заражены другим вирусом.

Вирусы животных

Вирусы являются важными возбудителями болезней у скота. Такие заболевания, как ящур и блутанг, вызываются вирусами. Домашние животные, такие как кошки, собаки и лошади, если их не вакцинировать, восприимчивы к серьезным вирусным инфекциям. Собачий парвовирус вызывается небольшим ДНК-вирусом и инфекция часто оканчивается смертельным исходом у щенков. Как и все беспозвоночные, медоносные пчелы восприимчивы ко многим вирусным инфекциям. Тем не менее, большинство вирусов сосуществует безвредно в организме хозяина не вызывает никаких признаков или симптомов заболевания.

Вирусы растений

Существует много типов вирусов растений, но часто они вызывают лишь потери урожая, и попытки их контролировать являются экономически невыгодными. Вирусы растений часто распространяются от растения к растению организмами, известными как векторы. Они, как правило, являются насекомыми, но было показано, что существуют такие векторы, как некоторые грибы, нематоды и одноклеточные организмы. Когда контроль за инфекцией растительных вирусов считается экономичным, например, в случае многолетних фруктов, усилия сосредоточены на убийстве векторов и удалении альтернативных хозяев, таких как сорняки. Растительные вирусы не могут инфицировать людей и других животных, потому что они могут размножаться только в живых растительных клетках. Растения имеют сложные и эффективные механизмы защиты от вирусов. Одним из наиболее эффективных механизмов является наличие так называемых генов сопротивления (R). Каждый ген R придает устойчивость к определенным вирусам, вызывая локальные зоны гибели клеток вокруг инфицированной клетки, которые часто можно увидеть невооруженным глазом в виде больших пятен. Это останавливает распространение инфекции. РНК-интерференция также обеспечивает эффективную защиту растений. При инфицировании, растения часто производят природные дезинфицирующие средства, которые убивают вирусы, такие как салициловая кислота, оксид азота, а также реактивные молекулы кислорода. Вирусные частицы растений или вирусоподобные частицы (VLP) находят применение в биотехнологии и нанотехнологии. Капсиды большинства растительных вирусов имеют простую и надежную конструкцию и могут быть получены в больших количествах либо путем заражения растений, либо путем экспрессии в различных гетерологичных системах. Частицы растительных вирусов могут быть модифицированы генетически и химически, чтобы инкапсулировать инородные материалы, и могут быть включены в супрамолекулярные структуры для использования в биотехнологии. 28)

Бактериальные вирусы

Бактериофаги являются общей и разнообразной группой вирусов и являются наиболее распространенной формой биологической единицы в водной среде – в океанах присутствует в десять раз больше этих вирусов, чем бактерий, достигая уровня в 250000000 бактериофагов на миллилитр морской воды. Эти вирусы заражают конкретных бактерий путем связывания с поверхностными молекулами рецепторов, а затем проникая в клетку. В течение короткого промежутка времени, в некоторых случаях нескольких минут, бактериальная полимераза начинает переводить вирусную мРНК в белок. Эти белки становятся либо новыми вирионами внутри клетки, либо вспомогательными белками, которые помогают в сборке новых вирионов, или белками, участвующими в лизисе клеток. Вирусные ферменты помогают разбивать клеточную мембрану, и, в случае фага Т4, в течение чуть более двадцати минут после инъекции, может быть освобождено более трехсот фагов. Основным путем, которым бактерии защищают себя от бактериофагов, является производство ферментов, которые разрушают чужеродную ДНК. Эти ферменты, называемые эндонуклеазы рестрикции, разрезают вирусную ДНК, которую бактериофаги вводят в бактериальные клетки. 29) Бактерии также содержат систему, которая использует последовательности CRISPR для сохранения фрагментов геномов вирусов, с которыми бактерии вступали в контакт в прошлом, что позволяет им блокировать репликацию вируса через форму РНК-интерференции. Это генетическая система обеспечивает бактериям приобретенный иммунитет к инфекции.

Архейские вирусы

Некоторые вирусы реплицируются в археях – это вирусы с двухцепочечной ДНК с необычными, а иногда и уникальными, формами. Эти вирусы были наиболее подробно изучены у термофильных архей, в частности, Sulfolobales и Thermoproteales. Защита против этих вирусов включает РНК-интерференцию от повторяющихся последовательностей ДНК в пределах архейских геномов, которые связаны с генами вирусов. Большинство архей имеют системы CRISPR-Cas в качестве адаптивной защиты от вирусов. Они позволяют археям сохранить участки вирусной ДНК, которые затем используются для выявления и устранения последующих инфекций вирусом с помощью процесса, аналогичного РНК-интерференции.

Роль в водных экосистемах

В чайной ложке морской воды содержится около одного миллиона вирусов. Большинство из них являются бактериофагами, которые безопасны для растений и животных, а в действительности имеют крайне важное значение для регулирования морских и пресноводных экосистем. Они заражают и разрушают бактерии в водных микробных сообществах, и являются наиболее важным механизмом рециркуляции углерода в морской среде. Органические молекулы, высвобождаемые из мертвых бактериальных клеток, стимулируют рост свежих бактерий и водорослей. Вирусная активность может также способствовать «биологическому насосу», процессу, посредством которого углерод поглощается в глубинах океана. Микроорганизмы составляют более 90% биомассы в море. Предполагается, что вирусы убивают примерно 20% этой биомассы каждый день, и что вирусов в океанах в 15 раз больше, чем бактерий и архей. Вирусы являются основными агентами, ответственными за быстрое уничтожение вредных водорослей, которые часто убивают других морских обитателей. Число вирусов в океане дополнительно уменьшается в глубинах и вдалеке от берега, где меньше организмов-хозяев. Как и любой организм, морские млекопитающие восприимчивы к вирусным инфекциям. В 1988 и 2002 годах, тысячи тюленей были убиты в Европе вирусом тюленьей чумки. Многие другие вирусы, в том числе калицивирусы, герпесвирусы, аденовирусы и парвовирусы, циркулируют в популяциях морских млекопитающих.

Роль в эволюции

Вирусы являются важным природным средством передачи генов между различными видами, что увеличивает генетическое разнообразие и является механизмом эволюции. Считается, что вирусы играли центральную роль в ранней эволюции, до диверсификации бактерий, архей и эукариот, во время последнего универсального общего предка жизни на Земле. Вирусы все еще являются одним из самых больших резервуаров неисследованного генетического разнообразия на Земле. 30)

Применения

Науки о жизни и медицина

Вирусы имеют важное значение для изучения молекулярной и клеточной биологии, поскольку они обеспечивают простые системы, которые могут быть использованы, чтобы манипулировать и исследовать функции клеток. Изучение и использование вирусов предоставляет ценную информацию об аспектах клеточной биологии. Например, вирусы оказались полезными при изучении генетики и способствовали пониманию основных механизмов молекулярной генетики, таких как репликация и транскрипция ДНК, процессинг, трансляция, транспорт белков РНК, и иммунология. Генетики часто используют вирусы как векторы для введения генов в клетки, которые они изучают. Это полезно для того, чтобы заставить клетку производить постороннее вещество, или для изучения эффекта введения нового гена в геном. Аналогичным образом, виротерапия использует вирусы в качестве векторов для лечения различных заболеваний, так как они могут специфически воздействовать на клетки-мишени и ДНК. Это может перспективно применяться при лечении рака и в генной терапии. Ученые из Восточной Европы использовали фаготерапию в качестве альтернативы антибиотикам в течение некоторого времени, и интерес к этому подходу растет, из-за высокого уровня устойчивости к антибиотикам в настоящее время у некоторых патогенных бактерий. Экспрессия гетерологичных белков вирусами является основой нескольких производственных процессов, которые в настоящее время используются для производства различных белков, таких как вакцинные антигены и антитела. Недавно были разработаны промышленные процессы с использованием вирусных векторов и ряда фармацевтических белков в доклинических и клинических испытаниях.

Виротерапия

Виротерапия предполагает использование генетически модифицированных вирусов для лечения заболеваний. Вирусы были изменены учеными, чтобы воспроизводиться в раковых клетках и уничтожать их, не заражая здоровые клетки. Talimogene laherparepvec (Т-VEC), например, представляет собой модифицированный вирус простого герпеса, который имеет ген, который необходим для репликации вирусов в здоровых клетках, удаленных и замененных на человеческий ген (GM-CSF), который стимулирует иммунитет. Когда этот вирус поражает раковые клетки, он разрушает их, и при этом наличие гена GM-CSF привлекает дендритные клетки из окружающих тканей тела. Дендритные клетки обрабатывают мертвые раковые клетки и представляют их компоненты в другие клетки иммунной системы. После завершения успешных клинических испытаний, этот вирус, как ожидается, получит одобрение для лечения рака кожи под названием меланома, в конце 2015 года. 31) Вирусы, которые были перепрограммированы для того, чтобы убивать раковые клетки, называются онколитическими вирусами.

Материаловедение и нанотехнологии

Современные тенденции в области нанотехнологий обещают сделать использование вирусов гораздо более универсальным. С точки зрения материаловеда, вирусы можно рассматривать как органические наночастицы. Их поверхность содержит конкретные инструменты, предназначенные для того, чтобы пересекать барьеры их клеток-хозяев. Размер и форма вирусов, а также количество и природа функциональных групп на их поверхности, точно определены. Таким образом, вирусы обычно используются в материаловедении в качестве матриксов для ковалентно связанных модификаций поверхности. Особым качеством вирусов является то, что они могут быть адаптированы с помощью направленной эволюции. Мощные методы, разработанные науками о жизни, становятся основой инженерных подходов к наноматериалам, открывая широкий спектр применения, выходящего далеко за пределы биологии и медицины. Из-за своего размера, формы и четко определенных химических структур, вирусы были использованы в качестве шаблонов для организации материалов на наноуровне. Недавние примеры включают работу в Научно-исследовательской лаборатории ВМС США в Вашингтоне, округ Колумбия, с использованием частиц мозаичного вируса коровьего гороха (CPMV) для усиления сигналов в сенсорах на основе микрочипов ДНК. В этом приложении, вирусные частицы отделяют флуоресцентные красители, используемые для сигнализации, чтобы предотвратить образование нефлуоресцирующих димеров, которые действуют в качестве гасителей. Другим примером может служить использование CPMV в качестве наноразмерного макета для молекулярной электроники.

Синтетические вирусы

Многие вирусы могут быть синтезированы заново («с нуля»). Первый синтетический вирус был создан в 2002 году. Однако, синтезирован был не фактический вирус, а его ДНК геном (в случае ДНК-вируса) или кДНК-копия его генома (в случае РНК-содержащих вирусов). Для многих семейств вирусов, безоболочечная синтетическая ДНК или РНК (ферментативно конвертируемая обратно из синтетической кДНК) является заразной при введении в клетку. То есть, они содержат всю необходимую информацию для создания новых вирусов. Эта технология в настоящее время используется для исследования новых стратегий вакцины. Способность синтезировать вирусы имеет далеко идущие последствия, так как вирусы не могут больше рассматриваться как вымершие, до тех пор, пока доступна информация об их последовательности генома и существуют пермиссивные клетки. По состоянию на март 2014 года, полноразмерные последовательности генома 3843 различных вирусов, включая вирус оспы, публично доступны в онлайновой базе данных, поддерживаемой Национальным институтом здравоохранения США.

Биологическое оружие

Способность вирусов вызывать разрушительные эпидемии в человеческом обществе привела к обеспокоенности тем, что вирусы могут применяться в качестве биологического оружия. Далее была выражена озабоченность об успешном воссоздании печально известного вируса гриппа 1918 года в лаборатории. 32) Вирус натуральной оспы уничтожал многочисленные общества на протяжении всей истории до его ликвидации. В мире есть только два центра, которые разрешены ВОЗ для сохранения запасов вируса натуральной оспы: институт Вектор в России и Центры по контролю и профилактике заболеваний в Соединенных Штатах. Опасения, что он может быть использован в качестве оружия, могут не быть совершенно необоснованными. Поскольку вакцина против оспы иногда имела серьезные побочные эффекты, она больше не используется на регулярной основе во всех странах мира. Таким образом, у большей части современной человеческой популяции практически не имеется сопротивления оспе, и они будут уязвимы для вируса.

:Tags

Список использованной литературы:


1) Breitbart M, Rohwer F. Here a virus, there a virus, everywhere the same virus?. Trends Microbiol. 2005;13(6):278–84. doi:10.1016/j.tim.2005.04.003. PMID 15936660
2) Rybicki, EP. The classification of organisms at the edge of life, or problems with virus systematics. S Afr J Sci. 1990;86:182–186
3) Harper D. The Online Etymology Dictionary. virion; 2011 [Retrieved 2014-12-19]
4) Bordenave G. Louis Pasteur (1822–1895). Microbes and Infection / Institut Pasteur. 2003;5(6):553–60. doi:10.1016/S1286-4579(03)00075-3. PMID 12758285
5) Fenner F.. In: Mahy B. W. J. and Van Regenmortal M. H. V.. Desk Encyclopedia of General Virology. 1 ed. Oxford, UK: Academic Press; 2009. ISBN 0-12-375146-2. p. 15
6) Rosen, FS. Isolation of poliovirus—John Enders and the Nobel Prize. New England Journal of Medicine. 2004;351(15):1481–83. doi:10.1056/NEJMp048202. PMID 15470207
7) Dimmock p. 12
8) Mahy WJ & Van Regenmortel MHV (eds). Desk Encyclopedia of General Virology. Oxford: Academic Press; 2009. ISBN 0-12-375146-2. p. 24
9) Collier pp. 11–12
10) Dimmock p. 55–7
11) Dimmock pp. 15–16
12) Kiselev NA, Sherman MB, Tsuprun VL. Negative staining of proteins. Electron Microsc. Rev.. 1990;3(1):43–72. doi:10.1016/0892-0354(90)90013-I. PMID 1715774
13) Rossmann MG, Mesyanzhinov VV, Arisaka F, Leiman PG. The bacteriophage T4 DNA injection machine. Current Opinion in Structural Biology. 2004;14(2):171–80. doi:10.1016/j.sbi.2004.02.001. PMID 15093831
14) Prangishvili D, Forterre P, Garrett RA. Viruses of the Archaea: a unifying view. Nature Reviews Microbiology. 2006;4(11):837–48. doi:10.1038/nrmicro1527. PMID 17041631
15) Saunders, Venetia A.; Carter, John. Virology: principles and applications. Chichester: John Wiley & Sons; 2007. ISBN 0-470-02387-2. p. 72
16) Duffy S, Holmes EC. Validation of high rates of nucleotide substitution in geminiviruses: phylogenetic evidence from East African cassava mosaic viruses. The Journal of General Virology. 2009;90(Pt 6):1539–47. doi:10.1099/vir.0.009266-0. PMID 19264617
17) Goudsmit, Jaap. Viral Sex. Oxford Univ Press, 1998.ISBN 978-0-19-512496-5 ISBN 0-19-512496-0
18) Dimmock p. 70
19) Alwine JC. Modulation of host cell stress responses by human cytomegalovirus. Curr. Top. Microbiol. Immunol.. 2008;325:263–79. doi:10.1007/978-3-540-77349-8_15. PMID 18637511
20) Baggesen DL, Sørensen G, Nielsen EM, Wegener HC. Phage typing of Salmonella Typhimurium – is it still a useful tool for surveillance and outbreak investigation?. Eurosurveillance. 2010 [Retrieved 2014-12-19];15(4):19471. PMID 20122382
21) ICTV Master Species List 2013 v2
22) Chen C, Chiu Y, Wei F, Koong F, Liu H, Shaw C, Hwu H, Hsiao K. High seroprevalence of Borna virus infection in schizophrenic patients, family members and mental health workers in Taiwan. Mol Psychiatry. 1999;4(1):33–8. doi:10.1038/sj.mp.4000484. PMID 10089006
23) Nguyen VT, McLaws ML, Dore GJ. Highly endemic hepatitis B infection in rural Vietnam. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 2007;22(12):2093–100. doi:10.1111/j.1440-1746.2007.05010.x. PMID 17645465
24) Shors pp. 193–194
25) Towner JS, Khristova ML, Sealy TK, et al.. Marburgvirus genomics and association with a large hemorrhagic fever outbreak in Angola. J. Virol.. 2006;80(13):6497–516. doi:10.1128/JVI.00069-06. PMID 16775337
26) Matter L, Kogelschatz K, Germann D. Serum levels of rubella virus antibodies indicating immunity: response to vaccination of subjects with low or undetectable antibody concentrations. J. Infect. Dis.. 1997;175(4):749–55. doi:10.1086/513967. PMID 9086126
27) Magden J, Kääriäinen L, Ahola T. Inhibitors of virus replication: recent developments and prospects. Appl. Microbiol. Biotechnol.. 2005;66(6):612–21. doi:10.1007/s00253-004-1783-3. PMID 15592828
28) Lomonossoff, GP. Recent Advances in Plant Virology. Caister Academic Press; 2011. ISBN 978-1-904455-75-2. Virus Particles and the Uses of Such Particles in Bio- and Nanotechnology
29) Bickle TA, Krüger DH. Biology of DNA restriction. Microbiol. Rev.. 1 June 1993;57(2):434–50. PMID 8336674
30) Suttle CA. Marine viruses—major players in the global ecosystem. Nature Reviews Microbiology. 2007;5(10):801–12. doi:10.1038/nrmicro1750. PMID 17853907
31) «Injectable T-VEC Offers Hope to Melanoma Patients», Medscape, May 28, 2015, Retrieved 20 May 2015
32) Genomes. «NIH viral genome database». Ncbi.nlm.nih.gov. Retrieved 2014-12-19
  • Поддержите наш проект - обратите внимание на наших спонсоров:

  • Отправить "Вирус" в LiveJournal
  • Отправить "Вирус" в Facebook
  • Отправить "Вирус" в VKontakte
  • Отправить "Вирус" в Twitter
  • Отправить "Вирус" в Odnoklassniki
  • Отправить "Вирус" в MoiMir
  • Отправить "Вирус" в Google
  • Отправить "Вирус" в myAOL
вирусы.txt · Последние изменения: 2016/06/28 15:40 — nataly